சில்வர் நைட்ரேட் பூச்சுகளின் உயிர்ப்படல எதிர்ப்பு விளைவு மற்றும் குணப்படுத்துதலைத் தூண்டுதல்

Nature.com தளத்திற்கு வருகை தந்ததற்கு நன்றி. நீங்கள் பயன்படுத்தும் உலாவியில் CSS ஆதரவு குறைவாக உள்ளது. சிறந்த முடிவுகளுக்கு, உங்கள் உலாவியின் புதிய பதிப்பைப் பயன்படுத்துமாறு (அல்லது இன்டர்நெட் எக்ஸ்ப்ளோரரில் இணக்கப் பயன்முறையை முடக்குமாறு) பரிந்துரைக்கிறோம். இதற்கிடையில், தொடர்ச்சியான ஆதரவை உறுதி செய்வதற்காக, நாங்கள் இந்தத் தளத்தை வடிவமைப்பு அல்லது ஜாவாஸ்கிரிப்ட் இல்லாமல் காண்பிக்கிறோம்.
காயங்களில் ஏற்படும் நுண்ணுயிரிகளின் வளர்ச்சி பெரும்பாலும் பயோஃபிலிம்களாக வெளிப்படுகிறது, இவை குணமடைவதைத் தடுக்கின்றன மற்றும் அவற்றை முற்றிலுமாக அகற்றுவது கடினம். புதிய வெள்ளிப் பற்றுகள் காயத் தொற்றுகளை எதிர்த்துப் போராடுவதாகக் கூறப்படுகின்றன, ஆனால் அவற்றின் பயோஃபிலிம் எதிர்ப்புத் திறன் மற்றும் தொற்று-சாராத குணப்படுத்தும் விளைவுகள் பொதுவாக அறியப்படவில்லை. ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் மற்றும் சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா ஆகியவற்றின் இன் விட்ரோ மற்றும் இன் விவோ பயோஃபிலிம் மாதிரிகளைப் பயன்படுத்தி, Ag1+ அயனிகளை உருவாக்கும் பற்றுகளின் செயல்திறனை நாங்கள் தெரிவிக்கிறோம்; எத்திலீன்டையமீன்டெட்ராஅசிட்டிக் அமிலம் மற்றும் பென்செத்தோனியம் குளோரைடு (Ag1+/EDTA/BC) கொண்ட Ag1+ பற்றுகள், மற்றும் சில்வர் நைட்ரேட் (Ag ஆக்ஸிசால்ட்ஸ்) கொண்ட பற்றுகள், இவை காய பயோஃபிலிமை எதிர்த்துப் போராட Ag1+, Ag2+ மற்றும் Ag3+ அயனிகளை உருவாக்குகின்றன மற்றும் குணமடைவதில் அதன் விளைவை ஆராய்கின்றன. இன் விட்ரோவிலும் எலிகளிலும் (C57BL/6j) காய பயோஃபிலிம் மீது Ag1+ பற்றுகள் மிகக் குறைந்த விளைவுகளையே கொண்டிருந்தன. இதற்கு மாறாக, ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புகள் மற்றும் Ag1+/EDTA/BC கட்டுகள், ஆய்வகச் சூழலில் உயிரிப்படலங்களில் உள்ள உயிருள்ள பாக்டீரியாக்களின் எண்ணிக்கையை கணிசமாகக் குறைத்தன. மேலும், எலியின் காய உயிரிப்படலங்களில் உள்ள பாக்டீரியா மற்றும் EPS கூறுகளில் குறிப்பிடத்தக்க குறைவையும் வெளிப்படுத்தின. இந்தக் கட்டுகள், உயிரிப்படலத் தொற்றுள்ள மற்றும் தொற்று இல்லாத காயங்களை ஆற்றுவதில் வெவ்வேறு விளைவுகளைக் கொண்டிருந்தன. கட்டுப்பாட்டு சிகிச்சைகள் மற்றும் பிற வெள்ளிக் கட்டுகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட உப்புக் கட்டுகள் மேல்தோல் மீளுருவாக்கம், காயத்தின் அளவு மற்றும் அழற்சி ஆகியவற்றில் அதிக நன்மை பயக்கும் விளைவுகளைக் கொண்டிருந்தன. வெள்ளிக் கட்டுகளின் வெவ்வேறு இயற்பியல்-வேதியியல் பண்புகள், காயத்தின் உயிரிப்படலம் மற்றும் ஆற்றுதல் ஆகியவற்றில் வெவ்வேறு விளைவுகளை ஏற்படுத்தக்கூடும். எனவே, உயிரிப்படலத் தொற்றுள்ள காயங்களுக்குச் சிகிச்சை அளிக்க ஒரு கட்டைத் தேர்ந்தெடுக்கும்போது இது கருத்தில் கொள்ளப்பட வேண்டும்.
நாள்பட்ட புண்கள் என்பவை, “ஒரு ஒழுங்கான மற்றும் சரியான நேரத்தில் குணமடைவதற்கான இயல்பான நிலைகளைக் கடந்து செல்லத் தவறும் புண்கள்” என வரையறுக்கப்படுகின்றன¹. நாள்பட்ட புண்கள் நோயாளிகளுக்கும் சுகாதார அமைப்புக்கும் உளவியல், சமூக மற்றும் பொருளாதாரச் சுமையை ஏற்படுத்துகின்றன. புண்கள் மற்றும் அதனுடன் தொடர்புடைய இணை நோய்களுக்குச் சிகிச்சை அளிப்பதற்கான NHS-இன் வருடாந்திரச் செலவு 2017–182-ல் £8.3 பில்லியன் என மதிப்பிடப்பட்டுள்ளது. நாள்பட்ட புண்கள் தற்போது அமெரிக்காவிலும் ஒரு அழுத்தமான பிரச்சனையாக உள்ளன; புண்களுடன் கூடிய நோயாளிகளுக்குச் சிகிச்சை அளிப்பதற்கான வருடாந்திரச் செலவு $28.1–$96.8 பில்லியன்³ என மெடிகேர் மதிப்பிடுகிறது.
காயம் குணமடைவதைத் தடுக்கும் ஒரு முக்கிய காரணி தொற்று ஆகும். தொற்றுகள் பெரும்பாலும் பயோஃபிலிம்களாக வெளிப்படுகின்றன, இவை குணமடையாத நாள்பட்ட காயங்களில் 78% இல் காணப்படுகின்றன. நுண்ணுயிரிகள், காயத்தின் மேற்பரப்புகள் போன்ற பரப்புகளில் மீளமுடியாதபடி ஒட்டிக்கொள்ளும்போது பயோஃபிலிம்கள் உருவாகின்றன, மேலும் அவை ஒன்றிணைந்து எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலார் பாலிமர் (EPS)-ஐ உற்பத்தி செய்யும் சமூகங்களை உருவாக்குகின்றன. காயத்தின் பயோஃபிலிம், திசு சேதத்திற்கு வழிவகுக்கும் அதிகரித்த அழற்சி எதிர்வினையுடன் தொடர்புடையது, இது குணமடைவதைத் தாமதப்படுத்தலாம் அல்லது தடுக்கலாம்4. திசு சேதத்தின் அதிகரிப்பு, மேட்ரிக்ஸ் மெட்டாலோபுரோட்டினேஸ்கள், கொலாஜனேஸ், எலாஸ்டேஸ் மற்றும் வினைத்திறன் கொண்ட ஆக்ஸிஜன் இனங்களின் அதிகரித்த செயல்பாட்டின் காரணமாக இருக்கலாம்5. மேலும், அழற்சி செல்கள் மற்றும் பயோஃபிலிம்கள் தாங்களாகவே ஆக்ஸிஜனை அதிக அளவில் பயன்படுத்துபவை, எனவே அவை உள்ளூர் திசு ஹைபோக்ஸியாவை ஏற்படுத்தி, திறம்பட்ட திசு பழுதுபார்ப்புக்குத் தேவையான முக்கிய ஆக்ஸிஜனை செல்களிடமிருந்து குறைத்துவிடும்6.
முதிர்ந்த பயோஃபிலிம்கள் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மருந்துகளுக்கு அதிக எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டவை. எனவே, பயோஃபிலிம் தொற்றுகளைக் கட்டுப்படுத்த, இயந்திரவியல் சிகிச்சையைத் தொடர்ந்து பயனுள்ள நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு சிகிச்சை போன்ற தீவிரமான உத்திகள் தேவைப்படுகின்றன. பயோஃபிலிம்கள் விரைவாக மீண்டும் உருவாகக்கூடியவை என்பதால், அறுவை சிகிச்சை மூலம் இறந்த திசுக்களை அகற்றிய பிறகு, பயனுள்ள நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மருந்துகள் அவை மீண்டும் உருவாகும் அபாயத்தைக் குறைக்க முடியும்.
நுண்ணுயிர் எதிர்ப்புப் பற்றுகளில் வெள்ளியின் பயன்பாடு அதிகரித்து வருகிறது, மேலும் இது நாள்பட்ட தொற்றுள்ள காயங்களுக்கு முதல் நிலை சிகிச்சையாகவும் பெரும்பாலும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. வணிக ரீதியாகக் கிடைக்கக்கூடிய பல வெள்ளிப் பற்றுகள் உள்ளன, ஒவ்வொன்றும் வெவ்வேறு வெள்ளிக் கலவை, செறிவு மற்றும் அடிப்படை மேட்ரிக்ஸைக் கொண்டுள்ளன. வெள்ளிக் கைப்பட்டைகளில் ஏற்பட்ட முன்னேற்றங்கள் புதிய வெள்ளிக் கைப்பட்டைகளின் வளர்ச்சிக்கு வழிவகுத்துள்ளன. வெள்ளியின் உலோக வடிவம் (Ag0) மந்தமானது; நுண்ணுயிர் எதிர்ப்புத் திறனை அடைய, அது ஒரு எலக்ட்ரானை இழந்து அயனி வெள்ளியாக (Ag1+) மாற வேண்டும். பாரம்பரிய வெள்ளிப் பற்றுகளில் வெள்ளிச் சேர்மங்கள் அல்லது உலோக வெள்ளி உள்ளன, அவை திரவத்துடன் தொடர்பு கொள்ளும்போது, ​​சிதைந்து Ag1+ அயனிகளை உருவாக்குகின்றன. இந்த Ag1+ அயனிகள் பாக்டீரியா செல்லுடன் வினைபுரிந்து, உயிர்வாழ்வதற்குத் தேவையான கட்டமைப்பு கூறுகள் அல்லது முக்கிய செயல்முறைகளிலிருந்து எலக்ட்ரான்களை நீக்குகின்றன. காப்புரிமை பெற்ற தொழில்நுட்பம், காயப் பற்றுகளில் சேர்க்கப்படும் Ag ஆக்சி உப்புகள் (வெள்ளி நைட்ரேட், Ag7NO11) என்ற புதிய வெள்ளிச் சேர்மத்தின் வளர்ச்சிக்கு வழிவகுத்துள்ளது. பாரம்பரிய வெள்ளியைப் போலல்லாமல், ஆக்சிஜன் கொண்ட உப்புகளின் சிதைவு, அதிக இணைதிறன் கொண்ட வெள்ளி நிலைகளை (Ag1+, Ag2+ மற்றும் Ag3+) உருவாக்குகிறது. சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா, ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் மற்றும் எஸ்செரிச்சியா கோலி போன்ற நோய்க்கிருமி பாக்டீரியாக்களுக்கு எதிராக, ஒற்றை அயனி வெள்ளியை (Ag1+) விட குறைந்த செறிவுள்ள ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புகள் அதிக செயல்திறன் மிக்கவை என்று இன் விட்ரோ ஆய்வுகள் காட்டியுள்ளன8,9. மற்றொரு புதிய வகை வெள்ளிப் பூச்சு, எத்திலீன்டையமீன்டெட்ராஅசிட்டிக் அமிலம் (EDTA) மற்றும் பென்செத்தோனியம் குளோரைடு (BC) ஆகிய கூடுதல் மூலப்பொருட்களைக் கொண்டுள்ளது. இவை பயோஃபிலிம் EPS-ஐ குறிவைத்து, அதன் மூலம் பயோஃபிலிமிற்குள் வெள்ளியின் ஊடுருவலை அதிகரிப்பதாகக் கூறப்படுகிறது. இந்த புதிய வெள்ளித் தொழில்நுட்பங்கள், காயத்தின் பயோஃபிலிம்களைக் குறிவைக்க புதிய வழிகளை வழங்குகின்றன. இருப்பினும், இந்த நுண்ணுயிர்க்கொல்லிகள் காயத்தின் சூழலில் பாதகமான சூழலை உருவாக்காமலும், குணமடைவதைத் தாமதப்படுத்தாமலும் இருப்பதை உறுதிசெய்ய, காயத்தின் சூழல் மற்றும் தொற்று-சாராத குணமடைதல் ஆகியவற்றின் மீதான அவற்றின் தாக்கம் முக்கியமானது. பல வெள்ளிப் பூச்சுகளில் இன் விட்ரோ வெள்ளி செல்நச்சுத்தன்மை குறித்த கவலைகள் பதிவாகியுள்ளன10,11. இருப்பினும், இன் விட்ரோ செல்நச்சுத்தன்மை இன்னும் இன் விவோ நச்சுத்தன்மையாக மாறவில்லை, மேலும் பல Ag1+ பூச்சுகள் ஒரு நல்ல பாதுகாப்புத் தன்மையை வெளிப்படுத்தியுள்ளன12.
இங்கு, புதுமையான வெள்ளிக் கலவைகளைக் கொண்ட கார்பாக்ஸிமெத்தில்செல்லுலோஸ் கட்டுகளின் செயல்திறனை, ஆய்வகத்திலும் (in vitro) மற்றும் உயிருள்ள உடலிலும் (in vivo) காயத்தின் உயிரிப்படலத்திற்கு எதிராக நாங்கள் ஆராய்ந்தோம். மேலும், நோய்த்தொற்றைச் சாராமல், நோயெதிர்ப்புத் துலங்கல்கள் மற்றும் குணமடைதல் ஆகியவற்றின் மீது இந்தக் கட்டுகளின் விளைவுகளும் மதிப்பிடப்பட்டன.
பயன்படுத்தப்பட்ட அனைத்துப் பற்றுக்களும் வணிகரீதியாகக் கிடைக்கக்கூடியவை. 3M கெராசெல் ஜெல் ஃபைபர் டிரெஸ்ஸிங் (3M, நட்ஸ்ஃபோர்ட், UK) என்பது ஒரு நுண்ணுயிரெதிர்ப்புத் தன்மையற்ற 100% கார்பாக்ஸிமெத்தில்செல்லுலோஸ் (CMC) ஜெல் ஃபைபர் பற்றுக் ஆகும், இது இந்த ஆய்வில் கட்டுப்பாட்டுப் பற்றுக்களாகப் பயன்படுத்தப்பட்டது. மூன்று நுண்ணுயிரெதிர்ப்பு CMC வெள்ளிப் பற்றுக்கள் மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன, அவற்றுள் 3M கெராசெல் Ag டிரெஸ்ஸிங் (3M, நட்ஸ்ஃபோர்ட், UK) ஒன்றாகும். இது உயர் இணைதிறன் கொண்ட வெள்ளி அயனிகளில் (Ag1+, Ag2+ மற்றும் Ag3+) 1.7 எடை சதவீதம் ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்பை (Ag7NO11) கொண்டுள்ளது. Ag7NO11 சிதைவடையும் போது, ​​Ag1+, Ag2+ மற்றும் Ag3+ அயனிகள் 1:2:4 என்ற விகிதத்தில் உருவாகின்றன. 1.2% சில்வர் குளோரைடு (Ag1+) கொண்ட அக்வாசெல் ஏஜி எக்ஸ்ட்ரா டிரெஸ்ஸிங் (கான்வாடெக், டீசைட், யுகே) 13 மற்றும் 1.2% சில்வர் குளோரைடு (Ag1+), EDTA மற்றும் பென்செத்தோனியம் குளோரைடு கொண்ட அக்வாசெல் ஏஜி + எக்ஸ்ட்ரா டிரெஸ்ஸிங் (கான்வாடெக், டீசைட், யுகே) 14.
இந்த ஆய்வில் பயன்படுத்தப்பட்ட திரிபுகள், சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா NCTC 10781 (பப்ளிக் ஹெல்த் இங்கிலாந்து, சாலிஸ்பரி) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் NCTC 6571 (பப்ளிக் ஹெல்த் இங்கிலாந்து, சாலிஸ்பரி) ஆகும்.
பாக்டீரியாக்கள் முல்லர்-ஹிண்டன் குழம்பில் (ஆக்ஸாய்டு, ஆல்ட்ரின்சாம், இங்கிலாந்து) இரவு முழுவதும் வளர்க்கப்பட்டன. பின்னர், அந்த இரவு நேர வளர்ப்பு, முல்லர்-ஹிண்டன் குழம்பில் 1:100 என்ற விகிதத்தில் நீர்த்துப் போகச் செய்யப்பட்டு, அதிலிருந்து 200 µl அளவு, முல்லர்-ஹிண்டன் அகார் தட்டுகளின் (சிக்மா-ஆல்ட்ரிச் கம்பெனி லிமிடெட், கென்ட், கிரேட் பிரிட்டன்) மீதுள்ள மலட்டுத்தன்மை கொண்ட 0.2 µm வாட்மேன் சைக்ளோபோர் சவ்வுகளில் (வாட்மேன் பிஎல்சி, மெய்ட்ஸ்டோன், இங்கிலாந்து) பரப்பப்பட்டது. 37°C வெப்பநிலையில் 24 மணி நேரத்திற்கு காலனி உயிரிப்படலம் உருவாக்கம் சோதிக்கப்பட்டது. இந்தக் காலனி உயிரிப்படலங்கள் மடக்கை சுருக்கத்திற்காக பரிசோதிக்கப்பட்டன.
கட்டுத்துணியை 3 செ.மீ² சதுரத் துண்டுகளாக வெட்டி, கிருமியழிக்கப்பட்ட அயனியாக்கம் செய்யப்பட்ட நீரில் முன் நனைக்கவும். அகார் தட்டில் உள்ள காலனியின் உயிர்ப்படலத்தின் மீது கட்டுத்துணியை வைக்கவும். ஒவ்வொரு 24 ஹெக்டேர் உயிர்ப்படலமும் அகற்றப்பட்டு, உயிர்ப்படலத்திற்குள் உள்ள வாழக்கூடிய பாக்டீரியாக்கள் (CFU/ml) டே-ஆங்கிள் நடுநிலையாக்கல் குழம்பில் (மெர்க்-மில்லிபோர்) தொடர் நீர்த்தல் (10⁻¹ முதல் 10⁻⁷ வரை) மூலம் அளவிடப்பட்டன. 37°C வெப்பநிலையில் 24 மணிநேர அடைகாத்தலுக்குப் பிறகு, முல்லர்-ஹிண்டன் அகார் தட்டுகளில் நிலையான தட்டு எண்ணிக்கை சோதனைகள் செய்யப்பட்டன. ஒவ்வொரு சிகிச்சையும் நேரப் புள்ளியும் மும்முறை செய்யப்பட்டன, மேலும் ஒவ்வொரு நீர்த்தலுக்கும் தட்டு எண்ணிக்கை சோதனைகள் மீண்டும் செய்யப்பட்டன.
ஐரோப்பிய ஒன்றிய ஏற்றுமதித் தரநிலைகளின்படி, பெண் லார்ஜ் ஒயிட் பன்றிகள் கொல்லப்பட்ட 15 நிமிடங்களுக்குள் அவற்றிலிருந்து பன்றியின் வயிற்றுத் தோல் பெறப்படுகிறது. தோல் மழிக்கப்பட்டு, ஆல்கஹால் துடைப்பான்களால் சுத்தம் செய்யப்பட்டது, பின்னர் தோலின் உயிர்ச்சக்தியை நீக்குவதற்காக 24 மணி நேரம் -80°C வெப்பநிலையில் உறைய வைக்கப்பட்டது. உறைநிலை நீங்கிய பிறகு, 1 செ.மீ² தோல் துண்டுகள், ஒவ்வொரு முறையும் 20 நிமிடங்களுக்கு PBS, 0.6% சோடியம் ஹைப்போகுளோரைட் மற்றும் 70% எத்தனால் கொண்டு மூன்று முறை கழுவப்பட்டன. மேல்தோலை அகற்றுவதற்கு முன், மீதமுள்ள எத்தனாலை அகற்றுவதற்காக, கிருமியழிக்கப்பட்ட PBS-இல் 3 முறை கழுவப்பட்டது. அந்தத் தோல், மேலே 0.45-μm-தடிமன் கொண்ட நைலான் சவ்வு (மெர்க்-மில்லிபோர்) மற்றும் 10% டல்பெக்கோவின் மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஈகிள் மீடியம் (டல்பெக்கோவின் மாற்றியமைக்கப்பட்ட ஈகிள் மீடியம் – ஆல்ட்ரிச் லிமிடெட்) சேர்க்கப்பட்ட 3 மிலி கரு மாட்டு சீரம் (சிக்மா) கொண்ட 3 உறிஞ்சும் பட்டைகள் (மெர்க்-மில்லிபோர்) உள்ள 6-குழித் தட்டில் வளர்க்கப்பட்டது.
பயோஃபிலிம் வெளிப்பாட்டு ஆய்வுகளுக்காக விவரிக்கப்பட்டபடி காலனி பயோஃபிலிம்கள் வளர்க்கப்பட்டன. சவ்வின் மீது பயோஃபிலிமை 72 மணி நேரம் வளர்த்த பிறகு, ஒரு மலட்டு ஊசி வளையத்தைப் பயன்படுத்தி பயோஃபிலிம் தோல் மேற்பரப்பில் இடப்பட்டு, சவ்வு அகற்றப்பட்டது. பின்னர், பயோஃபிலிம் முதிர்ச்சியடைந்து பன்றியின் தோலுடன் ஒட்டிக்கொள்ள அனுமதிப்பதற்காக, அது பன்றியின் டெர்மிஸில் கூடுதலாக 24 மணி நேரம் 37°C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கப்பட்டது. பயோஃபிலிம் முதிர்ச்சியடைந்து ஒட்டிக்கொண்ட பிறகு, மலட்டு வடிகட்டிய நீரால் முன்-ஈரமாக்கப்பட்ட 1.5 செமீ² கட்டு, நேரடியாக தோல் மேற்பரப்பில் இடப்பட்டு 37°C வெப்பநிலையில் 24 மணி நேரம் அடைகாக்கப்பட்டது. ஒவ்வொரு எக்ஸ்பிளான்ட்டின் நுனி மேற்பரப்பிலும் பிரெஸ்டோப்ளூ செல் உயிர்வாழ்திறன் வினைப்பொருளை (இன்விட்ரோஜென், லைஃப் டெக்னாலஜிஸ், பெய்ஸ்லி, யுகே) சீராகப் பூசி, 5 நிமிடங்கள் அடைகாப்பதன் மூலம், உயிர்வாழும் பாக்டீரியாக்கள் காட்சிப்படுத்தப்பட்டன. லெய்கா MZ8 நுண்ணோக்கியில் படங்களை உடனடியாகப் பிடிக்க லெய்கா DFC425 டிஜிட்டல் கேமராவைப் பயன்படுத்தவும். இளஞ்சிவப்பு நிறத்தில் குறிக்கப்பட்ட பகுதிகள், இமேஜ் ப்ரோ மென்பொருள் பதிப்பு 10 (மீடியா சைபர்நெட்டிக்ஸ் இன்க், ராக்வில், எம்டி இமேஜ்-ப்ரோ (mediacy.com)) ஐப் பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்டன. ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளபடி மேற்கொள்ளப்பட்டது.
இரவு முழுவதும் வளர்க்கப்பட்ட பாக்டீரியாக்கள், முல்லர்-ஹிண்டன் குழம்பில் 1:100 என்ற விகிதத்தில் நீர்க்கப்பட்டன. 200 μl வளர்ப்பானது, கிருமியழிக்கப்பட்ட 0.2 μm வாட்மேன் சைக்ளோபோர் மென்படலத்தில் (வாட்மேன், மெய்ட்ஸ்டோன், இங்கிலாந்து) சேர்க்கப்பட்டு, முல்லர்-ஹிண்டன் அகாரில் பரப்பப்பட்டது. முதிர்ந்த உயிரிப்படலம் உருவாகுவதற்காக, உயிரிப்படலத் தட்டுகள் 37°C வெப்பநிலையில் 72 மணி நேரம் அடைகாக்கப்பட்டன.
பயோஃபிலிம் முதிர்ச்சியடைந்த 3 நாட்களுக்குப் பிறகு, 3 செ.மீ² சதுர வடிவக் கட்டு ஒன்று பயோஃபிலிமின் மீது நேரடியாக வைக்கப்பட்டு, 37°C வெப்பநிலையில் 24 மணி நேரம் அடைகாக்கப்பட்டது. பயோஃபிலிம் மேற்பரப்பில் இருந்து கட்டை அகற்றிய பிறகு, ஒவ்வொரு பயோஃபிலிமின் மேற்பரப்பிலும் 1 மிலி பிரெஸ்டோப்ளூ செல் உயிர்வாழ்திறன் வினைப்பொருள் (இன்விட்ரோஜென், வால்டாம், எம்.ஏ) 20 வினாடிகளுக்குச் சேர்க்கப்பட்டது. நிக்கான் D2300 டிஜிட்டல் கேமராவைப் (நிக்கான் யுகே லிமிடெட், கிங்ஸ்டன், யுகே) பயன்படுத்தி நிற மாற்றங்கள் பதிவு செய்யப்படுவதற்கு முன்பு, மேற்பரப்புகள் உலர்த்தப்பட்டன.
மியூலர்-ஹிண்டன் அகாரில் இரவு முழுவதும் வளர்க்கப்படும் கல்ச்சர்களைத் தயாரித்து, தனித்தனி காலனிகளை 10 மிலி மியூலர்-ஹிண்டன் ப்ராத்திற்கு மாற்றி, 37°C வெப்பநிலையில் (100 rpm) ஒரு ஷேக்கரில் வைத்து அடைகாக்கவும். இரவு முழுவதும் அடைகாத்த பிறகு, அந்தக் கல்ச்சர் மியூலர்-ஹிண்டன் ப்ராத்தில் 1:100 என்ற விகிதத்தில் நீர்க்கப்பட்டு, அதிலிருந்து 300 µl மியூலர்-ஹிண்டன் அகாரில் உள்ள 0.2 µm வட்ட வடிவ வாட்மேன் சைக்ளோபோர் மென்படலத்தின் (வாட்மேன் இன்டர்நேஷனல், மெய்ட்ஸ்டோன், யுகே) மீது இடப்பட்டு, 72 மணி நேரத்திற்குள் 37°C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கப்பட்டது. முதிர்ந்த பயோஃபிலிம் கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளபடி காயத்தின் மீது பயன்படுத்தப்பட்டது.
விலங்குகளுடனான அனைத்துப் பணிகளும், விலங்கு நலன் மற்றும் நெறிமுறை மறுஆய்வு அலுவலகத்தால் (P8721BD27) அங்கீகரிக்கப்பட்ட ஒரு திட்ட உரிமத்தின் கீழும், 2012 திருத்தப்பட்ட ASPA-வின் கீழ் உள்துறை அமைச்சகத்தால் வெளியிடப்பட்ட வழிகாட்டுதல்களுக்கு இணங்கவும் மான்செஸ்டர் பல்கலைக்கழகத்தில் மேற்கொள்ளப்பட்டன. அனைத்து ஆசிரியர்களும் வருகை வழிகாட்டுதல்களைக் கடைப்பிடித்தனர். அனைத்து இன் விவோ ஆய்வுகளுக்கும் எட்டு வார வயதுடைய C57BL/6j எலிகள் (என்விகோ, ஆக்ஸ்ஃபோர்டு, இங்கிலாந்து) பயன்படுத்தப்பட்டன. எலிகளுக்கு ஐசோஃப்ளூரேன் (பிராமல் கிரிட்டிகல் கேர் லிமிடெட், வெஸ்ட் டிரேட்டன், இங்கிலாந்து) மூலம் மயக்க மருந்து கொடுக்கப்பட்டு, அவற்றின் முதுகுப் பகுதிகள் மழிக்கப்பட்டு சுத்தம் செய்யப்பட்டன. பின்னர் ஒவ்வொரு எலிக்கும் ஸ்டீஃபெல் பயாப்ஸி பஞ்ச் (ஷூகோ இன்டர்நேஷனல், ஹெர்ட்ஃபோர்ட்ஷையர், இங்கிலாந்து) பயன்படுத்தி 2 × 6 மிமீ அளவுள்ள வெட்டுக்காயம் ஏற்படுத்தப்பட்டது. பயோஃபிலிம் தொற்றுள்ள காயங்களுக்கு, மேலே விவரிக்கப்பட்டபடி சவ்வில் வளர்க்கப்பட்ட 72-மணி நேர காலனி பயோஃபிலிமை, காயம் ஏற்பட்ட உடனேயே ஒரு மலட்டு ஊசி வளையத்தைப் பயன்படுத்தி காயத்தின் தோல் அடுக்கில் இட்டு, சவ்வை அப்புறப்படுத்தவும். காயத்தின் சூழலை ஈரப்பதமாக வைத்திருக்க, ஒரு சதுர சென்டிமீட்டர் அளவுள்ள கட்டு, கிருமியழிக்கப்பட்ட நீரால் முன் நனைக்கப்படுகிறது. ஒவ்வொரு காயத்தின் மீதும் நேரடியாகக் கட்டுகள் இடப்பட்டு, 3M டெகாடெர்ம் படலத்தால் (3M, பிராக்னெல், இங்கிலாந்து) மூடப்பட்டன. கூடுதல் ஒட்டுதலுக்காக, அதன் ஓரங்களில் மாஸ்டிசோல் திரவப் பசை (எலோகுவெஸ்ட் ஹெல்த்கேர், ஃபெர்ன்டேல், மிச்சிகன்) பூசப்பட்டது. வலி நிவாரணியாக, புப்ரெனோர்பின் (அனிமல்கேர், யார்க், இங்கிலாந்து) 0.1 மி.கி/கி.கி என்ற செறிவில் கொடுக்கப்பட்டது. காயம் ஏற்பட்ட மூன்று நாட்களுக்குப் பிறகு, அட்டவணை 1 முறையைப் பயன்படுத்தி எலிகளைக் கொன்று, காயத்தின் பகுதியை அகற்றி, பாதியாக வெட்டி, தேவைக்கேற்ப சேமித்து வைக்கவும்.
ஹெமடாக்ஸிலின் (தெர்மோஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) மற்றும் ஈயோசின் (தெர்மோஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) சாயமேற்றல், உற்பத்தியாளரின் நெறிமுறைப்படி செய்யப்பட்டது. காயத்தின் பரப்பளவு மற்றும் மறுமேலடுக்கு உருவாக்கம் ஆகியவை இமேஜ் ப்ரோ மென்பொருள் பதிப்பு 10 (மீடியா சைபர்நெட்டிக்ஸ் இன்க், ராக்வில், எம்.டி.) பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்டன.
திசுப் பகுதிகள் சைலினில் (தெர்மோஃபிஷர் சயின்டிஃபிக், லஃப்பரோ, யுகே) மெழுகு நீக்கப்பட்டு, 100–50% தரப்படுத்தப்பட்ட எத்தனால் கொண்டு மீண்டும் நீரேற்றப்பட்டு, அயனியகற்றப்பட்ட நீரில் (தெர்மோஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) சிறிது நேரம் மூழ்கவைக்கப்பட்டன. உற்பத்தியாளரின் நெறிமுறைப்படி, வெக்டாஸ்டெய்ன் எலைட் ஏபிசி பிகே-6104 கிட்டை (வெக்டர் லேபரட்டரீஸ், பர்லிங்கேம், சிஏ) பயன்படுத்தி இம்யூனோஹிஸ்டோகெமிஸ்ட்ரி செய்யப்பட்டது. நியூட்ரோஃபில்களுக்கான முதன்மை ஆன்டிபாடிகள் என்ஐஎம்பி-ஆர்14 (தெர்மோஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்) மற்றும் மேக்ரோஃபேஜ்களுக்கான எம்எஸ் சிடி107பி ப்யூர் எம்3/84 (பிடி பயோசயின்சஸ், வோக்கிங்ஹாம், யுகே) ஆகியவை தடுப்புக் கரைசலில் 1:100 என்ற விகிதத்தில் நீர்த்துப்போகச் செய்யப்பட்டு, வெட்டப்பட்ட மேற்பரப்பில் சேர்க்கப்பட்டன. அதனைத் தொடர்ந்து, ஆன்டி-, வெக்டாஸ்டெய்ன் ஏபிசி மற்றும் வெக்டர் நோவா ரெட் பெராக்ஸிடேஸ் (எச்ஆர்பி) சப்ஸ்ட்ரேட் கிட் (வெக்டர் லேபரட்டரீஸ், பர்லிங்கேம், சிஏ) ஆகிய 2 ஆன்டிபாடிகள் சேர்க்கப்பட்டு, ஹெமடாக்ஸிலின் கொண்டு எதிர்சாயமிடப்பட்டன. ஒலிம்பஸ் BX43 நுண்ணோக்கி மற்றும் ஒலிம்பஸ் DP73 டிஜிட்டல் கேமரா (ஒலிம்பஸ், சௌதெண்ட்-ஆன்-சீ, இங்கிலாந்து) ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி படங்கள் பெறப்பட்டன.
தோல் மாதிரிகள் 4°C வெப்பநிலையில் 24 மணி நேரத்திற்கு, 0.1 M HEPES (pH 7.4) கரைசலில் உள்ள 2.5% குளுடரால்டிஹைட் மற்றும் 4% ஃபார்மால்டிஹைடில் நிலைப்படுத்தப்பட்டன. மாதிரிகள் படிநிலை எத்தனால் பயன்படுத்தி நீர் நீக்கம் செய்யப்பட்டு, Quorum K850 க்ரிட்டிகல் பாயிண்ட் ட்ரையர் (Quorum Technologies Ltd, Loughton, UK) மூலம் CO2-வில் உலர்த்தப்பட்டன. பின்னர், Quorum SC7620 மினி ஸ்பட்டரர்/க்ளோ டிஸ்சார்ஜ் அமைப்பைப் பயன்படுத்தி தங்கம்-பல்லேடியம் கலப்புலோகத்தால் ஸ்பட்டர் கோட்டிங் செய்யப்பட்டன. காயத்தின் மையப் புள்ளியைக் காண்பதற்காக, FEI Quanta 250 ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோப் (ThermoFisher Scientific) பயன்படுத்தி மாதிரிகள் படமெடுக்கப்பட்டன.
வெட்டி எடுக்கப்பட்ட எலியின் காயத்தின் மேற்பரப்பில் டோட்டோ-1 அயோடைடு (2 μM) பூசப்பட்டு, 37 °C வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்கள் அடைகாக்கப்பட்டது (தெர்மோஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்). பின்னர், 37 °C வெப்பநிலையில் சைட்டோ-60 (10 μM) கொண்டு சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டது (தெர்மோஃபிஷர் சயின்டிஃபிக்). லெய்கா TCS SP8 கருவியைப் பயன்படுத்தி 15 நிமிட Z-ஸ்டாக் படங்கள் உருவாக்கப்பட்டன.
உயிரியல் மற்றும் தொழில்நுட்ப ரீதியான நகல் தரவுகள், கிராஃப்பேட் பிரிசம் V9 மென்பொருளை (கிராஃப்பேட் சாஃப்ட்வேர், லா ஜோலா, CA) பயன்படுத்தி அட்டவணைப்படுத்தப்பட்டு பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. ஒவ்வொரு சிகிச்சைக்கும் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு இல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டுக்கும் இடையிலான வேறுபாடுகளைச் சோதிக்க, டன்னெட்டின் பிந்தைய சோதனையுடன் கூடிய பல ஒப்பீடுகளுடன் ஒருவழி மாறுபாட்டுப் பகுப்பாய்வு பயன்படுத்தப்பட்டது. p மதிப்பு <0.05 குறிப்பிடத்தக்கதாகக் கருதப்பட்டது.
வெள்ளி ஜெல் இழைப் பற்றுகளின் செயல்திறன், முதலில் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் மற்றும் சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா ஆகியவற்றின் பயோஃபிலிம் காலனிகளுக்கு எதிராக ஆய்வகத்தில் (in vitro) மதிப்பிடப்பட்டது. வெள்ளிப் பற்றுகள் வெள்ளியின் வெவ்வேறு சூத்திரங்களைக் கொண்டுள்ளன: பாரம்பரிய வெள்ளிப் பற்றுகள் Ag1+ அயனிகளை உருவாக்குகின்றன; EDTA/BC சேர்த்த பிறகு Ag1+ அயனிகளை உருவாக்கக்கூடிய வெள்ளிப் பற்றுகள், பயோஃபிலிம் மேட்ரிக்ஸை அழித்து, வெள்ளியின் பாக்டீரியா எதிர்ப்பு விளைவின் கீழ் பாக்டீரியாக்களை வெள்ளிக்கு வெளிப்படுத்துகின்றன. மேலும், Ag1+, Ag2+ மற்றும் Ag3+ அயனிகளை உருவாக்கும் ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட Ag உப்புகளைக் கொண்ட பற்றுகளும் உள்ளன. இதன் செயல்திறன், ஜெல் இழைகளால் செய்யப்பட்ட நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத ஒரு கட்டுப்பாட்டுப் பற்றுடன் ஒப்பிடப்பட்டது. பயோஃபிலிமிற்குள் மீதமுள்ள உயிருள்ள பாக்டீரியாக்கள் 8 நாட்களுக்கு ஒவ்வொரு 24 மணி நேரத்திற்கும் மதிப்பிடப்பட்டன (படம் 1). 5 ஆம் நாளில், பயோஃபிலிம் மீட்சியை மதிப்பிடுவதற்காக, 3.85 × 10⁵ ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் அல்லது 1.22 × 10⁵ சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா கொண்டு பயோஃபிலிம் மீண்டும் விதைக்கப்பட்டது. நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு இல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டுகளுடன் ஒப்பிடுகையில், Ag1+ கட்டுகள் 5 நாட்களுக்கு மேல் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் மற்றும் சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா உயிர்ப்படலங்களில் பாக்டீரியாவின் உயிர்வாழ்வில் மிகக் குறைந்த தாக்கத்தையே ஏற்படுத்தின. இதற்கு மாறாக, ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட Ag மற்றும் Ag1+ + EDTA/BC உப்புகளைக் கொண்ட கட்டுகள் 5 நாட்களுக்குள் உயிர்ப்படலத்திற்குள் இருந்த பாக்டீரியாக்களைக் கொல்வதில் திறம்படச் செயல்பட்டன. 5 ஆம் நாளில் மிதக்கும் பாக்டீரியாக்களை மீண்டும் மீண்டும் செலுத்திய பிறகு, உயிர்ப்படலம் மீண்டும் உருவானது காணப்படவில்லை (படம் 1).
வெள்ளிப் பூச்சுகளால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட பிறகு, ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் மற்றும் சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா உயிர்ப்படலங்களில் உள்ள வாழக்கூடிய பாக்டீரியாக்களின் அளவு நிர்ணயம். ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் மற்றும் சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசாவின் உயிர்ப்படலக் கூட்டங்களுக்கு வெள்ளிப் பூச்சுகள் அல்லது நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சுகள் மூலம் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டது, மேலும் மீதமுள்ள வாழக்கூடிய பாக்டீரியாக்களின் எண்ணிக்கை ஒவ்வொரு 24 மணி நேரத்திற்கும் தீர்மானிக்கப்பட்டது. 5 நாட்களுக்குப் பிறகு, உயிர்ப்படலம் 3.85×10⁵S. ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் அல்லது 1.22×10⁵P. கொண்டு மீண்டும் விதைக்கப்பட்டது. உயிர்ப்படல மீட்சியை மதிப்பிடுவதற்காக, பாக்டீரியோபிளாங்க்டன் சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசாவின் கூட்டங்கள் தனித்தனியாக உருவாக்கப்பட்டன. வரைபடங்கள் சராசரி +/- திட்டப் பிழையைக் காட்டுகின்றன.
பயோஃபிலிம் உயிர்வாழ்வில் வெள்ளிப் பூச்சுகளின் விளைவைக் காட்சிப்படுத்த, பன்றியின் தோலில் உடலுக்கு வெளியே வளர்க்கப்பட்ட முதிர்ந்த பயோஃபிலிம்களுக்குப் பூச்சுகள் இடப்பட்டன. 24 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு, பூச்சு அகற்றப்பட்டு, பயோஃபிலிம் ஒரு நீல நிற வினைபுரியும் சாயத்தால் சாயமிடப்பட்டது, இது உயிருள்ள பாக்டீரியாக்களால் வளர்சிதைமாற்றம் செய்யப்பட்டு இளஞ்சிவப்பு நிறமாக மாறியது. கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சுகளால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட பயோஃபிலிம்கள் இளஞ்சிவப்பு நிறத்தில் இருந்தன, இது பயோஃபிலிமிற்குள் உயிர்வாழும் பாக்டீரியாக்கள் இருப்பதைக் குறிக்கிறது (படம் 2A). இதற்கு மாறாக, Ag ஆக்ஸிசோல்கள் பூச்சால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட பயோஃபிலிம் முதன்மையாக நீல நிறத்தில் இருந்தது, இது பன்றியின் தோலின் மேற்பரப்பில் மீதமுள்ள பாக்டீரியாக்கள் உயிர்வாழாத பாக்டீரியாக்கள் என்பதைக் குறிக்கிறது (படம் 2B). Ag1+-ஐக் கொண்ட பூச்சுகளால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட பயோஃபிலிம்களில் நீலம் மற்றும் இளஞ்சிவப்பு கலந்த நிறம் காணப்பட்டது, இது பயோஃபிலிமிற்குள் உயிர்வாழும் மற்றும் உயிர்வாழாத பாக்டீரியாக்கள் இருப்பதைக் குறிக்கிறது (படம் 2C), அதேசமயம் Ag1+-ஐக் கொண்ட EDTA/BC பூச்சுகள் பெரும்பாலும் நீல நிறத்துடனும் சில இளஞ்சிவப்புப் புள்ளிகளுடனும் இருந்தன, இது வெள்ளிப் பூச்சால் பாதிக்கப்படாத பகுதிகளைக் குறிக்கிறது (படம் 2D). செயலில் உள்ள (இளஞ்சிவப்பு) மற்றும் செயலற்ற (நீலம்) பகுதிகளை அளவிட்டதில், கட்டுப்பாட்டுப் பகுதி 75% செயலில் இருந்தது தெரியவந்தது (படம் 2E). Ag1+ + EDTA/BC கட்டுகள், ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்பு கட்டுகளைப் போலவே செயல்பட்டன; அவற்றின் உயிர்வாழும் விகிதங்கள் முறையே 13% மற்றும் 14% ஆக இருந்தன. Ag1+ கட்டு, பாக்டீரியாவின் உயிர்வாழும் திறனை 21% குறைத்தது. பின்னர், இந்த உயிரிப்படலங்கள் ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி (SEM) மூலம் உற்றுநோக்கப்பட்டன. கட்டுப்பாட்டு கட்டு மற்றும் Ag1+ கட்டு ஆகியவற்றைக் கொண்டு சிகிச்சையளித்த பிறகு, பன்றியின் தோலை மூடியபடி சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசாவின் ஒரு படலம் காணப்பட்டது (படம் 2F,H). ஆனால், Ag1+ கட்டு கொண்டு சிகிச்சையளித்த பிறகு, சில பாக்டீரியா செல்களும், அவற்றின் அடியில் சில பாக்டீரியா செல்களும் காணப்பட்டன. கொலாஜன் இழைகளை பன்றியின் தோலின் திசு அமைப்பாகக் கருதலாம் (படம் 2G). Ag1+ + EDTA/BC கட்டு கொண்டு சிகிச்சையளித்த பிறகு, பாக்டீரியாத் திட்டுகளும், அவற்றின் அடியில் உள்ள கொலாஜன் இழைத் திட்டுகளும் காணப்பட்டன (படம் 2I).
வெள்ளிப் பூச்சு சிகிச்சைக்குப் பிறகு சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா உயிர்ப்படலத்தைக் காட்சிப்படுத்துதல். (A–D) பன்றியின் தோலில் வளர்ந்த சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா உயிர்ப்படலங்களில் உள்ள பாக்டீரியாவின் உயிர்வாழும் தன்மை, வெள்ளிப் பூச்சுகள் அல்லது நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சுகளுடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட 24 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு, பிரெஸ்டோப்ளூ உயிர்வாழும் சாயத்தைப் பயன்படுத்தி காட்சிப்படுத்தப்பட்டது. உயிருள்ள பாக்டீரியாக்கள் இளஞ்சிவப்பு நிறத்திலும், உயிர்வாழாத பாக்டீரியாக்கள் மற்றும் பன்றியின் தோல் நீல நிறத்திலும் காட்டப்பட்டுள்ளன. (E) பன்றியின் தோலில் (இளஞ்சிவப்புப் புள்ளி) வளர்ந்து, 24 மணி நேரத்திற்கு வெள்ளிப் பூச்சு அல்லது நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சுடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா உயிர்ப்படலங்களின் (SEM அளவுகோல் = 5 µm) அளவீடு, ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி இமேஜ் ப்ரோ பதிப்பு 10 (FI) ஐப் பயன்படுத்தி செய்யப்பட்டது. (J–M) வடிகட்டிகளில் வளர்ந்த காலனி உயிர்ப்படலங்கள், வெள்ளிப் பூச்சுகளுடன் 24 மணிநேர அடைகாத்தலுக்குப் பிறகு பிரெஸ்டோப்ளூ வினைபுரியும் சாயத்தால் கறைப்படுத்தப்பட்டன.
கட்டுக்களுக்கும் உயிரிப்படலங்களுக்கும் இடையிலான நெருங்கிய தொடர்பு, கட்டுக்களின் செயல்திறனைப் பாதித்ததா என்பதைத் தீர்மானிக்க, ஒரு தட்டையான மேற்பரப்பில் வைக்கப்பட்ட காலனி உயிரிப்படலங்கள் 24 மணி நேரம் கட்டுக்களால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டு, பின்னர் வினைபுரியும் சாயங்களால் கறைப்படுத்தப்பட்டன. சிகிச்சையளிக்கப்படாத உயிரிப்படலம் அடர் இளஞ்சிவப்பு நிறத்தில் இருந்தது (படம் 2J). ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட Ag உப்புகளைக் கொண்ட கட்டுக்களால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட உயிரிப்படலங்களுடன் (படம் 2K) ஒப்பிடுகையில், Ag1+ அல்லது Ag1+ + EDTA/BC கொண்ட கட்டுக்களால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட உயிரிப்படலங்கள் இளஞ்சிவப்பு கறை படிந்த பட்டைகளைக் காட்டின (படம் 2L,M). இந்த இளஞ்சிவப்பு நிறம், உயிருள்ள பாக்டீரியாக்கள் இருப்பதைக் குறிக்கிறது மற்றும் இது கட்டுக்குள் உள்ள தையல் பகுதியுடன் தொடர்புடையது. தைக்கப்பட்ட இந்தப் பகுதிகள், உயிரிப்படலத்திற்குள் உள்ள பாக்டீரியாக்கள் உயிர்வாழ அனுமதிக்கும் இறந்த இடைவெளிகளை உருவாக்குகின்றன.
உயிரினங்களுக்குள் வெள்ளிப் பூச்சுகளின் செயல்திறனை மதிப்பிடுவதற்காக, முதிர்ந்த S. aureus மற்றும் P. aeruginosa உயிரிப்படலங்களால் பாதிக்கப்பட்ட எலிகளின் முழு ஆழமுள்ள வெட்டப்பட்ட காயங்களுக்கு, நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு இல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சுகள் அல்லது வெள்ளிப் பூச்சுகள் கொண்டு சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டது. 3 நாட்கள் சிகிச்சைக்குப் பிறகு, நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு இல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சுகள் மற்றும் பிற வெள்ளிப் பூச்சுகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட உப்புப் பூச்சுகளைக் கொண்டு சிகிச்சை அளித்தபோது காயத்தின் அளவு சிறியதாக இருந்ததை புறத்தோற்றப் படப் பகுப்பாய்வு காட்டியது (படம் 3A-H). இந்தக் கண்டுபிடிப்புகளை உறுதிப்படுத்த, காயங்கள் சேகரிக்கப்பட்டு, ஹீமடாக்சிலின் மற்றும் ஈயோசின் சாயம் பூசப்பட்ட திசுப் பிரிவுகளில், இமேஜ் புரோ மென்பொருள் பதிப்பு 10-ஐப் பயன்படுத்தி காயத்தின் பரப்பளவு மற்றும் மறுமேலடுக்கு உருவாக்கம் ஆகியவை அளவிடப்பட்டன (படம் 3I-L).
பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களின் மேற்பரப்பு மற்றும் மறுமேலடுக்கு உருவாக்கம் ஆகியவற்றின் மீது வெள்ளிப் பூச்சுகளின் விளைவு. (A–H) நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சு, ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட Ag உப்புப் பூச்சு, Ag1+ பூச்சு மற்றும் Ag1+ பூச்சு ஆகியவற்றைக் கொண்டு மூன்று நாட்கள் சிகிச்சைக்குப் பிறகு, சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா (A–D) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் (E–H) ஆகியவற்றின் பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட சிறிய செல்கள். பிரதிநிதித்துவ மேக்ரோஸ்கோபிக் படங்கள். Ag1+ + EDTA/BC பூச்சு கொண்ட எலிகளின் காயங்கள். (IL) பிரதிநிதித்துவ சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா தொற்று, காயத்தின் பரப்பளவு மற்றும் மேலடுக்கு மீளுருவாக்கத்தை அளவிடப் பயன்படும், ஹெமடாக்ஸிலின் மற்றும் ஈயோசின் கொண்டு சாயமிடப்பட்ட திசுவியல் பிரிவுகள். சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா (M, N) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் (O, P) பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களின் பரப்பளவு (M, O) மற்றும் மறுமேலடுக்கு உருவாக்க சதவீதம் (N, P) ஆகியவற்றின் அளவீடு (ஒவ்வொரு சிகிச்சைக் குழுவிலும் n = 12). வரைபடங்கள் சராசரி மற்றும்/அல்லது திட்டப் பிழையைக் காட்டுகின்றன. * என்பது p = < 0.05 என்பதையும், ** என்பது p = < 0.01 என்பதையும் குறிக்கிறது; புறத்தோற்ற அளவு = 2.5 மி.மீ, திசுவியல் அளவு = 500 µm.
சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா பயோஃபிலிம் தொற்றால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களில் காயப் பரப்பளவின் அளவீடு (படம் 3M), Ag ஆக்ஸிசால்ட்களால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட காயங்கள் சராசரியாக 2.5 மிமீ² காய அளவைக் கொண்டிருந்தன என்பதைக் காட்டியது, அதேசமயம் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டு சராசரியாக 3.1 மிமீ² காய அளவைக் கொண்டிருந்தது, இது உண்மையல்ல. புள்ளிவிவர முக்கியத்துவத்தை எட்டியது (படம் 3M). p = 0.423). Ag1+ அல்லது Ag1+ + EDTA/BC உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட காயங்கள் காயப் பரப்பளவில் எந்தக் குறைவையும் காட்டவில்லை (முறையே 3.1 மிமீ² மற்றும் 3.6 மிமீ²). ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட Ag உப்பு கட்டுடனான சிகிச்சையானது, நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டு (முறையே 34% மற்றும் 15%; p = 0.029) மற்றும் Ag1+ அல்லது Ag1+ + EDTA/BC (முறையே 10% மற்றும் 11%) (படம் 3N) ஆகியவற்றை விட அதிக அளவில் மறுமேலடுக்கு உருவாக்கத்தை ஊக்குவித்தது.
S. aureus பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களிலும், காயத்தின் பரப்பளவு மற்றும் எபிதீலியல் மீளுருவாக்கம் ஆகியவற்றில் இதே போன்ற போக்குகள் காணப்பட்டன (படம் 3O). ஆக்சிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புகளைக் கொண்ட கட்டுகள், கட்டுப்பாட்டு நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுடன் (2.6 மிமீ²) ஒப்பிடும்போது காயத்தின் பரப்பளவை (2.0 மிமீ²) 23% குறைத்தன, இருப்பினும் இந்தக் குறைப்பு குறிப்பிடத்தக்கதாக இல்லை (p = 0.304) (படம் 3O). கூடுதலாக, Ag1+ சிகிச்சைக் குழுவில் காயத்தின் பரப்பளவு சற்றே குறைக்கப்பட்டது (2.4 மிமீ²), அதேசமயம் Ag1+ + EDTA/BC கட்டு கொண்டு சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட காயம், காயத்தின் பரப்பளவைக் குறைக்கவில்லை (2.9 மிமீ²). Ag-யின் ஆக்சிஜன் உப்புகள், நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டுகளால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட காயங்களை விட (12%, p = 0.003), S. aureus பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களில் எபிதீலியல் மீளுருவாக்கத்தை (31%) அதிக அளவில் ஊக்குவித்தன (படம் 3P). Ag1+ டிரஸ்ஸிங் (16%, p = 0.903) மற்றும் Ag+1 + EDTA/BC டிரஸ்ஸிங் (14%, p = 0.965) ஆகியவை கட்டுப்பாட்டுக் குழுவைப் போன்றே எபிதீலியல் மீளுருவாக்கத்தின் அளவுகளைக் காட்டின.
பயோஃபிலிம் மேட்ரிக்ஸில் வெள்ளிப் பூச்சுகளின் விளைவைக் காட்சிப்படுத்த, டோட்டோ 1 மற்றும் சைட்டோ 60 அயோடைடு சாயமேற்றல் செய்யப்பட்டது (படம் 4). டோட்டோ 1 அயோடைடு என்பது ஒரு செல் ஊடுருவாத சாயமாகும், இது பயோஃபிலிம்களின் EPS-இல் ஏராளமாக உள்ள புறச்செல் நியூக்ளிக் அமிலங்களைத் துல்லியமாகக் காட்சிப்படுத்தப் பயன்படுகிறது. சைட்டோ 60 என்பது ஒரு எதிர்சாயமாகப் பயன்படுத்தப்படும் செல் ஊடுருவும் சாயமாகும்¹⁶. சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா (படம் 4A-D) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் (படம் 4I-L) ஆகியவற்றின் பயோஃபிலிம்கள் செலுத்தப்பட்ட காயங்களில் டோட்டோ 1 மற்றும் சைட்டோ 60 அயோடைடின் ஆய்வுகள், 3 நாட்கள் பூச்சு சிகிச்சைக்குப் பிறகு, பயோஃபிலிமில் உள்ள EPS கணிசமாகக் குறைந்திருப்பதைக் காட்டின. ஆக்சிஜனேற்றப்பட்ட உப்புகள் Ag மற்றும் Ag¹⁺ + EDTA/BC ஆகியவற்றைக் கொண்டது. கூடுதல் ஆன்டிபயோஃபில்ம் கூறுகள் இல்லாத Ag1+ கட்டுத்துணிகள், சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா தொற்று ஏற்பட்ட காயங்களில் செல்-சாராத டிஎன்ஏ-வை குறிப்பிடத்தக்க அளவில் குறைத்தன, ஆனால் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் தொற்று ஏற்பட்ட காயங்களில் குறைந்த செயல்திறனையே கொண்டிருந்தன.
கட்டுப்பாட்டு அல்லது வெள்ளிப் பூச்சுகளைக் கொண்டு 3 நாட்கள் சிகிச்சைக்குப் பிறகு காயத்தின் உயிரிப்படலத்தின் உயிருள்ள உடலினுள் படமெடுத்தல். புற உயிரணு உயிரிப்படல பாலிமர்களின் ஒரு அங்கமான புற உயிரணு நியூக்ளிக் அமிலங்களைக் காட்சிப்படுத்த, டோட்டோ 1 (பச்சை) கொண்டு சாயமேற்றப்பட்ட சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா (A–D) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் (I–L) ஆகியவற்றின் கான்ஃபோகல் படங்கள். அக உயிரணு நியூக்ளிக் அமிலங்களுக்கு சாயமேற்ற, சைட்டோ 60 (சிவப்பு) பயன்படுத்தவும். அமிலங்கள். பி. கட்டுப்பாட்டு மற்றும் வெள்ளிப் பூச்சுகளைக் கொண்டு 3 நாட்கள் சிகிச்சைக்குப் பிறகு சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா (E–H) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் (M–P) உயிரிப்படலங்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களின் ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கிப் படங்கள். SEM அளவுகோல் = 5 µm. கான்ஃபோகல் படமெடுப்பு அளவுகோல் = 50 µm.
ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி மூலம் செய்யப்பட்ட ஆய்வில், சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா (படம் 4E-H) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் (படம் 4M-P) ஆகியவற்றின் பயோஃபிலிம் காலனிகள் செலுத்தப்பட்ட எலிகளின் காயங்களில், அனைத்து வெள்ளிப் பூச்சுகளையும் கொண்டு 3 நாட்கள் சிகிச்சை அளித்த பிறகு, பாக்டீரியாக்களின் எண்ணிக்கை கணிசமாகக் குறைந்திருந்தது தெரியவந்தது.
பயோஃபிலிம் தொற்றுள்ள எலிகளில் காய அழற்சியின் மீது வெள்ளிப் பூச்சுகளின் விளைவை மதிப்பிடுவதற்காக, கட்டுப்பாடு அல்லது வெள்ளிப் பூச்சுகளால் 3 நாட்கள் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட பயோஃபிலிம் தொற்றுள்ள காயங்களின் பகுதிகள், நியூட்ரோபில்கள் மற்றும் மேக்ரோபேஜ்களுக்கு குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளைப் பயன்படுத்தி இம்யூனோஹிஸ்டோகெமிக்கல் முறையில் சாயமிடப்பட்டன. உள்ளக நியூட்ரோபில்கள் மற்றும் மேக்ரோபேஜ்களின் அளவு நிர்ணயம். கிரானுலேஷன் திசு. படம் 5). மூன்று நாட்கள் சிகிச்சைக்குப் பிறகு, நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பூச்சுகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​அனைத்து வெள்ளிப் பூச்சுகளும் சூடோமோனாஸ் ஏருகினோசா தொற்றுள்ள காயங்களில் நியூட்ரோபில்கள் மற்றும் மேக்ரோபேஜ்களின் எண்ணிக்கையைக் குறைத்தன. இருப்பினும், சோதிக்கப்பட்ட மற்ற வெள்ளிப் பூச்சுகளுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புப் பூச்சுடனான சிகிச்சையானது நியூட்ரோபில்கள் (p = <0.0001) மற்றும் மேக்ரோபேஜ்களில் (p = <0.0001) அதிகக் குறைவை ஏற்படுத்தியது (படம் 5I,J). Ag1+ + EDTA/BC காயத்தின் பயோஃபிலிம் மீது அதிக விளைவைக் கொண்டிருந்தாலும், அது Ag1+ பூச்சை விட நியூட்ரோபில் மற்றும் மேக்ரோபேஜ் அளவுகளைக் குறைந்த அளவிலேயே குறைத்தது. கட்டுப்பாட்டுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​Ag (p = <0.0001), Ag1+ (p = 0.0008) மற்றும் Ag1++ EDTA/BC (p = 0.0043) ஆக்சிசோல்களைக் கொண்டு கட்டுப் போட்ட பிறகு, S. aureus பயோஃபிலிம் தொற்றால் மிதமான காயங்கள் பாதிக்கப்பட்டிருப்பதும் காணப்பட்டது. நியூட்ரோபீனியாவிற்கும் இதே போன்ற போக்குகள் காணப்படுகின்றன (படம் 5K). இருப்பினும், S. aureus பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களில், ஆக்சிஜனேற்றப்பட்ட Ag உப்பு கட்டு மட்டுமே கட்டுப்பாட்டுடன் ஒப்பிடும்போது கிரானுலேஷன் திசுக்களில் உள்ள மேக்ரோபேஜ்களின் எண்ணிக்கையில் குறிப்பிடத்தக்க குறைவைக் காட்டியது (p = 0.0339) (படம் 5L).
சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களில், நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மருந்து இல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டு அல்லது வெள்ளிக் கட்டுகளைக் கொண்டு 3 நாட்கள் சிகிச்சை அளித்த பிறகு, நியூட்ரோஃபில்கள் மற்றும் மேக்ரோபேஜ்கள் அளவிடப்பட்டன. நியூட்ரோஃபில்கள் அல்லது மேக்ரோபேஜ்களுக்கு குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளைக் கொண்டு சாயம் பூசப்பட்ட திசுப் பிரிவுகளில் நியூட்ரோஃபில்கள் (AD) மற்றும் மேக்ரோபேஜ்கள் (EH) அளவிடப்பட்டன. சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா (I மற்றும் J) மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் (K & L) பயோஃபிலிம்களால் பாதிக்கப்பட்ட காயங்களில் நியூட்ரோஃபில்கள் (I மற்றும் K) மற்றும் மேக்ரோபேஜ்கள் (J மற்றும் L) அளவிடுதல். ஒவ்வொரு குழுவிற்கும் N = 12. வரைபடங்கள் சராசரி +/- திட்டப் பிழை, நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மருந்து இல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டுடன் ஒப்பிடும்போது முக்கியத்துவ மதிப்புகள் ஆகியவற்றைக் காட்டுகின்றன, * என்பது p = < 0.05, ** என்பது p = < 0.01; *** என்பது p = < 0.001; *** என்பது p = <0.0001 என்பதைக் குறிக்கிறது.
பின்னர், தொற்று-சாராத குணப்படுத்துதலில் வெள்ளிப் பற்றுகளின் விளைவை நாங்கள் மதிப்பிட்டோம். தொற்று இல்லாத வெட்டுக்காயங்களுக்கு, நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு இல்லாத கட்டுப்பாட்டுப் பற்று அல்லது ஒரு வெள்ளிப் பற்று கொண்டு 3 நாட்களுக்கு சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டது (படம் 6). பரிசோதிக்கப்பட்ட வெள்ளிப் பற்றுகளில், ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட உப்புப் பற்று கொண்டு சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட காயங்கள் மட்டுமே, கட்டுப்பாட்டுப் பற்று கொண்டு சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட காயங்களை விட மேக்ரோஸ்கோபிக் படங்களில் சிறியதாகத் தோன்றின (படம் 6A-D). திசுவியல் பகுப்பாய்வைப் பயன்படுத்தி காயத்தின் பரப்பளவை அளவிட்டதில், Ag ஆக்ஸிசோல்ஸ் பற்று கொண்டு சிகிச்சை அளித்த பிறகு சராசரி காயப் பரப்பளவு 2.35 மிமீ² ஆக இருந்தது, இது கட்டுப்பாட்டுக் குழுவுடன் சிகிச்சை அளிக்கப்பட்ட காயங்களின் 2.96 மிமீ² உடன் ஒப்பிடும்போது, ​​ஆனால் இந்த வேறுபாடு புள்ளிவிவர முக்கியத்துவத்தை எட்டவில்லை (p = 0.488) (படம் 6I). இதற்கு மாறாக, Ag1+ (3.38 மிமீ², p = 0.757) அல்லது Ag1+ + EDTA/BC (4.18 மிமீ², p = 0.054) பற்றுகளைக் கொண்டு சிகிச்சை அளித்த பிறகு, கட்டுப்பாட்டுக் குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது காயப் பரப்பளவில் எந்தக் குறைவும் காணப்படவில்லை. கட்டுப்பாட்டுக் குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​Ag ஆக்ஸிசோல் கட்டுடன் அதிகரித்த எபிதீலியல் மீளுருவாக்கம் காணப்பட்டது (முறையே 30% மற்றும் 22%), இது குறிப்பிடத்தக்க அளவை எட்டவில்லை என்றாலும் (p = 0.067), இது மிகவும் முக்கியமானது மற்றும் முந்தைய முடிவுகளை உறுதிப்படுத்துகிறது. ஆக்ஸிசோல்கள் கொண்ட ஒரு கட்டு, எபிதீலியல் மீளுருவாக்கத்தை ஊக்குவிக்கிறது. -தொற்று இல்லாத காயங்களின் எபிதீலியல் மீளுருவாக்கம்¹⁷. இதற்கு மாறாக, Ag¹⁺ அல்லது Ag¹⁺ + EDTA/BC கட்டுகளுடனான சிகிச்சையானது எந்த விளைவையும் ஏற்படுத்தவில்லை அல்லது கட்டுப்பாட்டுக் குழுவுடன் ஒப்பிடும்போது எபிதீலியல் மீளுருவாக்கம் குறைந்ததைக் காட்டியது.
முழுமையான அறுவை சிகிச்சை மூலம் அகற்றப்பட்ட, தொற்று இல்லாத எலிகளில் காயம் குணமடைவதில் வெள்ளி காயக்கட்டு ஏற்படுத்தும் விளைவு. (AD) நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு மருந்து இல்லாத கட்டுப்பாட்டுக் கட்டு மற்றும் ஒரு வெள்ளிக் கட்டு ஆகியவற்றைக் கொண்டு மூன்று நாட்கள் சிகிச்சை அளித்த பிறகு எடுக்கப்பட்ட காயங்களின் மாதிரிப் பருநிலை படங்கள். (EH) ஹெமடாக்ஸிலின் மற்றும் ஈயோசின் கொண்டு சாயமேற்றப்பட்ட மாதிரி காயப் பகுதிகள். காயத்தின் மையப் பகுதியில் உள்ள திசுவியல் பிரிவுகளிலிருந்து, படப் பகுப்பாய்வு மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி காயப் பகுதியின் அளவு (I) மற்றும் மறுமேலடுக்கு உருவாதலின் சதவீதம் (J) ஆகியவை கணக்கிடப்பட்டன (ஒவ்வொரு சிகிச்சைக் குழுவிற்கும் n = 11–12). வரைபடங்கள் சராசரி +/- திட்டப் பிழையைக் காட்டுகின்றன. * என்பது p = <0.05 என்பதைக் குறிக்கிறது.
காயங்களை ஆற்றுவதில் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு சிகிச்சையாக வெள்ளி நீண்ட காலமாகப் பயன்படுத்தப்பட்டு வருகிறது, ஆனால் அதன் பலவிதமான கலவைகள் மற்றும் செலுத்தும் முறைகள் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்புத் திறனில் வேறுபாடுகளை ஏற்படுத்தக்கூடும்¹⁸. மேலும், குறிப்பிட்ட வெள்ளி செலுத்தும் முறைகளின் உயிரிப்படல எதிர்ப்புப் பண்புகள் முழுமையாகப் புரிந்து கொள்ளப்படவில்லை. புரவலரின் நோயெதிர்ப்புத் திறன் மிதக்கும் பாக்டீரியாக்களுக்கு எதிராக ஒப்பீட்டளவில் திறம்படச் செயல்பட்டாலும், அது பொதுவாக உயிரிப்படலங்களுக்கு எதிராகக் குறைந்த செயல்திறனையே கொண்டுள்ளது¹⁹. மிதக்கும் பாக்டீரியாக்கள் மேக்ரோபேஜ்களால் எளிதில் விழுங்கப்படுகின்றன, ஆனால் உயிரிப்படலங்களுக்குள், திரண்ட செல்கள் கூடுதல் சிக்கல்களை ஏற்படுத்துகின்றன. அவை புரவலரின் நோயெதிர்ப்புத் திறனைக் கட்டுப்படுத்துவதால், நோயெதிர்ப்பு செல்கள் அப்போப்டோசிஸுக்கு உள்ளாகி, நோயெதிர்ப்புத் திறனை மேம்படுத்த அழற்சி காரணிகளை வெளியிடுகின்றன²⁰. சில வெள்ளணுக்கள் உயிரிப்படலங்களுக்குள் ஊடுருவ முடியும்²¹, ஆனால் இந்த பாதுகாப்பு பலவீனமடைந்தவுடன் அவற்றால் பாக்டீரியாக்களை விழுங்க இயலாது என்பது கண்டறியப்பட்டுள்ளது²². காயத்தில் ஏற்படும் உயிரிப்படலத் தொற்றுக்கு எதிராக புரவலரின் நோயெதிர்ப்புத் திறனை ஆதரிக்க ஒரு முழுமையான அணுகுமுறை பயன்படுத்தப்பட வேண்டும். காயத்தைச் சுத்தம் செய்வது உயிரிப்படலத்தை உடல்ரீதியாகச் சிதைத்து, பெரும்பாலான உயிரிச்சுமையை அகற்ற முடியும், ஆனால் எஞ்சியிருக்கும் உயிரிப்படலத்திற்கு எதிராக புரவலரின் நோயெதிர்ப்புத் திறன் திறனற்றதாக இருக்கலாம், குறிப்பாக புரவலரின் நோயெதிர்ப்புத் திறன் பலவீனமடைந்திருந்தால். இவ்வாறு, வெள்ளிப் பற்றுகள் போன்ற நுண்ணுயிரெதிர்ப்பு சிகிச்சைகள், நோயாளியின் நோயெதிர்ப்பு மண்டலத்திற்கு ஆதரவளித்து, உயிரிப்படலத் தொற்றுகளை நீக்க முடியும். அதன் கலவை, செறிவு, கரைதிறன் மற்றும் செலுத்தப்படும் மூலப்பொருள் ஆகியவை வெள்ளியின் நுண்ணுயிரெதிர்ப்புத் திறனைப் பாதிக்கக்கூடும். சமீபத்திய ஆண்டுகளில், வெள்ளி பதப்படுத்தும் தொழில்நுட்பத்தில் ஏற்பட்டுள்ள முன்னேற்றங்கள், இந்தப் பற்றுகளை மேலும் செயல்திறன் மிக்கதாக ஆக்கியுள்ளன9,23. வெள்ளிப் பற்றுத் தொழில்நுட்பம் முன்னேறி வருவதால், காயத் தொற்றைக் கட்டுப்படுத்துவதில் இந்தப் பற்றுகளின் செயல்திறனையும், அதைவிட முக்கியமாக, இந்த வீரியம் மிக்க வெள்ளி வடிவங்கள் காயத்தின் சூழல் மற்றும் குணமடைதல் மீது ஏற்படுத்தும் தாக்கத்தையும் புரிந்துகொள்வது அவசியமாகும்.
இந்த ஆய்வில், பல்வேறு இன் விட்ரோ மற்றும் இன் விவோ மாதிரிகளைப் பயன்படுத்தி, பயோஃபிலிம்களுக்கு எதிராக Ag1+ அயனிகளை உருவாக்கும் இரண்டு மேம்பட்ட வெள்ளிப் பூச்சுகளின் செயல்திறனை, வழக்கமான வெள்ளிப் பூச்சுகளுடன் ஒப்பிட்டோம். மேலும், காயத்தின் சூழல் மற்றும் தொற்று-சாராத குணமடைதல் ஆகியவற்றின் மீது இந்தப் பூச்சுகளின் விளைவையும் நாங்கள் மதிப்பிட்டோம். விநியோக மேட்ரிக்ஸின் தாக்கத்தைக் குறைப்பதற்காக, சோதிக்கப்பட்ட அனைத்து வெள்ளிப் பூச்சுகளும் கார்பாக்ஸிமெத்தில்செல்லுலோஸால் ஆனவையாக இருந்தன.
சூடோமோனாஸ் ஏருஜினோசா மற்றும் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் ஆகியவற்றின் காலனித்துவ உயிர்ப்படலங்களுக்கு எதிராக இந்த வெள்ளிப் பூச்சுகளைப் பற்றிய எங்கள் ஆரம்பக்கட்ட மதிப்பீடு, பாரம்பரிய Ag1+ பூச்சுகளைப் போலல்லாமல், Ag1+ + EDTA/BC மற்றும் ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புகள் ஆகிய இரண்டு மேம்பட்ட வெள்ளிப் பூச்சுகள், சில நாட்களுக்குள் உயிர்ப்படல பாக்டீரியாக்களை திறம்பட அழிக்கின்றன என்பதைக் காட்டுகிறது. கூடுதலாக, இந்த பூச்சுகள் மிதக்கும் பாக்டீரியாக்களுடன் மீண்டும் மீண்டும் தொடர்பு கொள்ளும்போது உயிர்ப்படலம் மீண்டும் உருவாவதைத் தடுக்கின்றன. Ag1+ பூச்சில், Ag1+ + EDTA/BC-ல் உள்ள அதே வெள்ளிச் சேர்மம் மற்றும் அடிப்படை மேட்ரிக்ஸான சில்வர் குளோரைடு இருந்தது, மேலும் அதே காலகட்டத்தில் உயிர்ப்படலத்திற்குள் பாக்டீரியாவின் உயிர்வாழ்வில் இது ஒரு வரையறுக்கப்பட்ட விளைவைக் கொண்டிருந்தது. அதே மேட்ரிக்ஸ் மற்றும் ஒரு வெள்ளிச் சேர்மத்தைக் கொண்ட Ag1+ பூச்சை விட, Ag1+ + EDTA/BC பூச்சு உயிர்ப்படலத்திற்கு எதிராக அதிக செயல்திறன் மிக்கதாக இருந்தது என்ற அவதானிப்பு, உயிர்ப்படலத்திற்கு எதிராக சில்வர் குளோரைடின் செயல்திறனை அதிகரிக்க கூடுதல் பொருட்கள் தேவை என்ற கருத்தை ஆதரிக்கிறது, இது வேறு இடங்களில்15 தெரிவிக்கப்பட்டுள்ளது. இந்த முடிவுகள், BC மற்றும் EDTA ஆகியவை ஒட்டுமொத்த கட்டுப் பொருளின் செயல்திறனுக்கு ஒரு கூடுதல் பங்களிப்பை வழங்குகின்றன என்ற கருத்தை ஆதரிக்கின்றன. மேலும், Ag1+ கட்டுப் பொருட்களில் இந்தக் கூறு இல்லாதது, ஆய்வகச் சோதனையில் செயல்திறனை நிரூபிக்கத் தவறியதற்குக் காரணமாக இருந்திருக்கலாம். Ag2+ மற்றும் Ag3+ அயனிகளை உருவாக்கும் ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்பு கட்டுப் பொருட்கள், Ag1+ ஐ விட வலுவான பாக்டீரியா எதிர்ப்பு செயல்திறனைக் காட்டின என்றும், Ag1+ + EDTA/BC க்கு இணையான அளவில் செயல்திறனைக் கொண்டிருந்தன என்றும் நாங்கள் கண்டறிந்தோம். இருப்பினும், அதிக ரிடாக்ஸ் பொட்டன்ஷியல் காரணமாக, Ag3+ அயனிகள் காயத்தின் பயோஃபிலிம்களுக்கு எதிராக எவ்வளவு காலம் செயலில் மற்றும் செயல்திறனுடன் இருக்கும் என்பது தெளிவாக இல்லை, எனவே இது மேலும் ஆய்வு செய்யப்பட வேண்டும். கூடுதலாக, இந்த ஆய்வில் சோதிக்கப்படாத Ag1+ அயனிகளை உருவாக்கும் பல வேறுபட்ட கட்டுப் பொருட்கள் உள்ளன. இந்தக் கட்டுப் பொருட்கள் வெவ்வேறு வெள்ளிச் சேர்மங்கள், செறிவுகள் மற்றும் அடிப்படை மேட்ரிக்ஸ்களால் ஆனவை, இவை Ag1+ அயனிகளின் விநியோகத்தையும் பயோஃபிலிம்களுக்கு எதிரான அவற்றின் செயல்திறனையும் பாதிக்கக்கூடும். பயோஃபிலிம்களுக்கு எதிரான காயக் கட்டுப் பொருட்களின் செயல்திறனை மதிப்பிடுவதற்குப் பல வேறுபட்ட ஆய்வக மற்றும் உயிருள்ள மாதிரிகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன என்பதும் குறிப்பிடத்தக்கது. பயன்படுத்தப்படும் மாதிரியின் வகை, அத்துடன் இந்த மாதிரிகளில் பயன்படுத்தப்படும் ஊடகத்தின் உப்பு மற்றும் புரத உள்ளடக்கம் ஆகியவை கட்டுப் பொருளின் செயல்திறனைப் பாதிக்கும். எங்களின் இன் விவோ மாதிரியில், நாங்கள் பயோஃபிலிமை இன் விட்ரோவில் முதிர்ச்சியடைய அனுமதித்து, பின்னர் அதை காயத்தின் தோல் மேற்பரப்பிற்கு மாற்றினோம். காயத்தில் இடப்பட்ட பிளாங்க்டானிக் பாக்டீரியாக்களுக்கு எதிராக புரவலர் எலியின் நோயெதிர்ப்புத் திறன் ஒப்பீட்டளவில் திறம்பட செயல்படுகிறது, இதனால் காயம் குணமாகும்போது ஒரு பயோஃபிலிம் உருவாகிறது. காயத்தில் முதிர்ந்த பயோஃபிலிமைச் சேர்ப்பது, குணமடைதல் தொடங்குவதற்கு முன்பே முதிர்ந்த பயோஃபிலிம் காயத்திற்குள் தன்னை நிலைநிறுத்திக் கொள்ள அனுமதிப்பதன் மூலம், பயோஃபிலிம் உருவாக்கத்திற்கு எதிரான புரவலரின் நோயெதிர்ப்புத் திறனின் செயல்திறனைக் கட்டுப்படுத்துகிறது. இவ்வாறு, காயங்கள் குணமாகத் தொடங்குவதற்கு முன்பே, முதிர்ந்த பயோஃபிலிம்களின் மீது நுண்ணுயிர் எதிர்ப்புப் பூச்சுகளின் செயல்திறனை மதிப்பிட எங்கள் மாதிரி எங்களுக்கு உதவுகிறது.
ஆய்வகத்தில் வளர்க்கப்பட்ட பயோஃபிலிம்கள் மற்றும் பன்றியின் தோலில் வெள்ளிப் பற்றுகளின் செயல்திறனை, பற்றுகளின் பொருத்தம் பாதித்ததையும் நாங்கள் கண்டறிந்தோம். பற்றுகளின் நுண்ணுயிரெதிர்ப்பு செயல்திறனுக்கு, காயத்துடன் நெருங்கிய தொடர்பு இருப்பது மிகவும் முக்கியமானது எனக் கருதப்படுகிறது²⁴,²⁵. ஆக்சிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புகளைக் கொண்ட பற்றுகள், முதிர்ந்த பயோஃபிலிம்களுடன் நெருங்கிய தொடர்பில் இருந்தன. இதன் விளைவாக, 24 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு பயோஃபிலிமிற்குள் இருந்த உயிருள்ள பாக்டீரியாக்களின் எண்ணிக்கையில் குறிப்பிடத்தக்க குறைவு ஏற்பட்டது. இதற்கு மாறாக, Ag¹⁺ மற்றும் Ag¹⁺ + EDTA/BC பற்றுகளைக் கொண்டு சிகிச்சை அளித்தபோது, ​​கணிசமான எண்ணிக்கையிலான உயிருள்ள பாக்டீரியாக்கள் எஞ்சியிருந்தன. இந்தப் பற்றுகளில், பற்றுகளின் முழு நீளத்திற்கும் தையல்கள் உள்ளன. இவை, பயோஃபிலிமுடன் நெருங்கிய தொடர்பைத் தடுக்கும் இறந்த இடைவெளிகளை உருவாக்குகின்றன. எங்களின் ஆய்வக ஆய்வுகளில், இந்தத் தொடர்பற்ற பகுதிகள் பயோஃபிலிமிற்குள் இருந்த உயிருள்ள பாக்டீரியாக்களைக் கொல்வதைத் தடுத்தன. நாங்கள் சிகிச்சை அளித்த 24 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு மட்டுமே பாக்டீரியாக்களின் உயிர்வாழும் திறனை மதிப்பிட்டோம்; காலப்போக்கில், பற்று அதிக ஈரப்பதத்துடன் ஆகும்போது, ​​இறந்த இடைவெளிகள் குறைவாக இருக்கலாம், இது இந்த உயிருள்ள பாக்டீரியாக்களுக்கான பரப்பளவைக் குறைக்கும். இருப்பினும், இது பற்றின் முக்கியத்துவத்தை எடுத்துக்காட்டுகிறது, பற்றில் உள்ள வெள்ளியின் வகையை மட்டுமல்ல.
பல்வேறு வெள்ளித் தொழில்நுட்பங்களின் செயல்திறனை ஒப்பிடுவதற்கு ஆய்வக ஆய்வுகள் பயனுள்ளதாக இருந்தாலும், உயிருள்ள திசுக்களில் உள்ள உயிரிப்படலங்கள் மீது இந்தக் கட்டுகளின் விளைவுகளைப் புரிந்துகொள்வதும் முக்கியம். ஏனெனில், அங்கு புரவலன் திசு மற்றும் நோயெதிர்ப்புத் துலங்கல்கள், உயிரிப்படலங்களுக்கு எதிரான கட்டுகளின் செயல்திறனுக்குப் பங்களிக்கின்றன. காயங்களில் உள்ள உயிரிப்படலங்கள் மீதான இந்தக் கட்டுகளின் விளைவு, ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி மற்றும் உயிரணுக்களுக்கு உள்ளேயும் வெளியேயும் உள்ள டிஎன்ஏ சாயங்களைப் பயன்படுத்தி உயிரிப்படலத்திற்கு EPS சாயம் பூசுதல் ஆகியவற்றின் மூலம் கவனிக்கப்பட்டது. 3 நாட்கள் சிகிச்சைக்குப் பிறகு, உயிரிப்படலம் தொற்றடைந்த காயங்களில் உள்ள உயிரணுக்களற்ற டிஎன்ஏ-வைக் குறைப்பதில் அனைத்துக் கட்டுகளும் திறம்படச் செயல்பட்டன, ஆனால் ஸ்டேஃபிளோகாக்கஸ் ஆரியஸ் தொற்றடைந்த காயங்களில் Ag1+ கட்டு குறைந்த செயல்திறன் கொண்டதாக இருந்தது என்பதைக் கண்டறிந்தோம். ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி மேலும் காட்டியதாவது, வெள்ளிக் கட்டுகளால் சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட காயங்களில் கணிசமாகக் குறைவான பாக்டீரியாக்களே இருந்தன. இருப்பினும், Ag1+ கட்டுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட Ag உப்பு கட்டு மற்றும் Ag1+ + EDTA/BC கட்டு ஆகியவற்றில் இது மிகவும் தெளிவாகத் தெரிந்தது. சோதிக்கப்பட்ட வெள்ளிப் பற்றுகள் பயோஃபிலிம் கட்டமைப்பில் பல்வேறு அளவிலான தாக்கத்தை ஏற்படுத்தியதை இந்தத் தரவுகள் காட்டுகின்றன, ஆனால் எந்தவொரு வெள்ளிப் பற்றுகளாலும் பயோஃபிலிமை முற்றிலுமாக அகற்ற முடியவில்லை. இது, காயங்களில் ஏற்படும் பயோஃபிலிம் தொற்றுகளுக்கு ஒரு முழுமையான சிகிச்சை அணுகுமுறையின் அவசியத்தை வலியுறுத்துகிறது; அதாவது வெள்ளிக் கைப்பட்டைகளைப் பயன்படுத்துதல். சிகிச்சைக்கு முன், பெரும்பாலான பயோஃபிலிமை அகற்றுவதற்காக, பாதிக்கப்பட்ட திசுக்களை உடல்ரீதியாக அகற்றும் செயல்முறை செய்யப்படுகிறது.
நாள்பட்ட காயங்கள் பெரும்பாலும் கடுமையான அழற்சி நிலையில் காணப்படுகின்றன. அதிகப்படியான அழற்சி செல்கள் நீண்ட காலத்திற்கு காயத்தின் திசுக்களில் தங்கி, திசு சேதத்தை ஏற்படுத்துவதோடு, காயத்தில் திறமையான செல் வளர்சிதை மாற்றம் மற்றும் செயல்பாட்டிற்குத் தேவையான ஆக்ஸிஜனையும் குறைத்துவிடுகின்றன²⁶. பயோஃபிலிம்கள், செல் பெருக்கம் மற்றும் இடம்பெயர்வைத் தடுப்பது, அழற்சியைத் தூண்டும் சைட்டோகைன்களைச் செயல்படுத்துவது உட்பட பல்வேறு வழிகளில் குணமடைவதைப் பாதிப்பதன் மூலம், காயத்திற்கு எதிரான இந்தச் சூழலை மேலும் மோசமாக்குகின்றன²⁷. வெள்ளிப் பூச்சுகள் அதிக செயல்திறன் மிக்கவையாக மாறி வருவதால், அவை காயத்தின் சூழல் மற்றும் குணமடைதல் மீது ஏற்படுத்தும் தாக்கத்தைப் புரிந்துகொள்வது அவசியமாகிறது.
சுவாரஸ்யமாக, அனைத்து வெள்ளிப் பூச்சுகளும் பயோஃபிலிம் அமைப்பைப் பாதித்தபோதிலும், ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புப் பூச்சுகள் மட்டுமே இந்தத் தொற்றுக் காயங்களில் மறுமேலடுக்கு உருவாக்கத்தை அதிகரித்தன. இந்தத் தரவுகள் எங்களின் முந்தைய கண்டுபிடிப்புகள்¹⁷ மற்றும் கலன் மற்றும் குழுவினரின் (2017)²⁸ கண்டுபிடிப்புகளையும் ஆதரிக்கின்றன; அவை ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட வெள்ளி உப்புகளின் நல்ல பாதுகாப்பு மற்றும் நச்சுத்தன்மை விவரங்களைக் காட்டின, ஏனெனில் குறைந்த செறிவுகளில் உள்ள வெள்ளி பயோஃபிலிம்களுக்கு எதிராகச் செயல்பட்டது.
எங்கள் தற்போதைய ஆய்வு, நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு வெள்ளிப் பற்றுகளுக்கு இடையேயான வெள்ளித் தொழில்நுட்ப வேறுபாடுகளையும், காயத்தின் சூழல் மற்றும் தொற்று-சாராத குணப்படுத்துதலில் இந்தத் தொழில்நுட்பத்தின் தாக்கத்தையும் எடுத்துக்காட்டுகிறது. இருப்பினும், Ag1+ + EDTA/BC பற்று, காயமடைந்த முயல் காதுகளின் குணப்படுத்தும் அளவுருக்களை உயிருள்ள நிலையில் மேம்படுத்தியதாகக் காட்டும் முந்தைய ஆய்வுகளிலிருந்து இந்த முடிவுகள் வேறுபடுகின்றன. ஆயினும், இது விலங்கு மாதிரிகள், அளவீட்டு நேரங்கள் மற்றும் பாக்டீரியா பயன்பாட்டு முறைகளில் உள்ள வேறுபாடுகளால் இருக்கலாம்29. இந்த நேர்வில், பற்றின் செயல்திறன் மிக்க உட்பொருட்கள் உயிரிப்படலத்தின் மீது நீண்ட காலத்திற்குச் செயல்பட அனுமதிப்பதற்காக, காயம் ஏற்பட்ட 12 நாட்களுக்குப் பிறகு காயத்தின் அளவீடுகள் எடுக்கப்பட்டன. Ag1+ + EDTA/BC கொண்டு சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட, மருத்துவ ரீதியாகத் தொற்றுக்குள்ளான கால் புண்கள், சிகிச்சையின் முதல் வாரத்திற்குப் பிறகு ஆரம்பத்தில் அளவில் அதிகரித்தன என்றும், பின்னர் Ag1+ + EDTA/BC உடனான அடுத்த 3 வார சிகிச்சையின் போதும், நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத மருந்துகளைப் பயன்படுத்திய 4 வாரங்களுக்குள்ளும் அளவில் அதிகரித்தன என்றும் காட்டிய ஒரு ஆய்வின் மூலம் இது ஆதரிக்கப்படுகிறது. புண்களின் அளவைக் குறைக்க CMC பற்றுகள் பயன்படுகின்றன30.
வெள்ளியின் சில வடிவங்களும் செறிவுகளும் முன்னர் இன் விட்ரோவில் (in vitro) செல்நச்சுத்தன்மை கொண்டவை எனக் காட்டப்பட்டுள்ளன¹¹, ஆனால் இந்த இன் விட்ரோ முடிவுகள் எப்போதும் இன் விவோவில் (in vivo) பாதகமான விளைவுகளாக மாறுவதில்லை. கூடுதலாக, வெள்ளி தொழில்நுட்பத்தில் ஏற்பட்ட முன்னேற்றங்கள் மற்றும் காயக்கட்டுகளில் உள்ள வெள்ளி சேர்மங்கள் மற்றும் செறிவுகள் பற்றிய சிறந்த புரிதல் ஆகியவை பல பாதுகாப்பான மற்றும் பயனுள்ள வெள்ளிக் காயக்கட்டுகளின் வளர்ச்சிக்கு வழிவகுத்துள்ளன. இருப்பினும், வெள்ளிக் காயக்கட்டு தொழில்நுட்பம் முன்னேறும்போது, ​​காயத்தின் சூழலில் இந்தக் காயக்கட்டுகளின் தாக்கத்தைப் புரிந்துகொள்வது முக்கியம்³¹,³²,³³. அழற்சியைத் தூண்டும் M1 வகையுடன் ஒப்பிடும்போது, ​​அழற்சிக்கு எதிரான M2 மேக்ரோபேஜ்களின் விகிதம் அதிகரித்திருப்பதோடு, மறுமேலடுக்கு உருவாக்கம் அதிகரித்த விகிதமும் தொடர்புடையது என்று முன்னர் தெரிவிக்கப்பட்டது. வெள்ளி ஹைட்ரோஜெல் காயக்கட்டுகளை, வெள்ளி சல்ஃபாடியாசைன் மற்றும் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பு அல்லாத ஹைட்ரோஜெல்களுடன் ஒப்பிட்ட முந்தைய எலி மாதிரியில் இது கவனிக்கப்பட்டது³⁴.
நாள்பட்ட காயங்கள் அதிகப்படியான அழற்சியை வெளிப்படுத்தக்கூடும், மேலும் அதிகப்படியான நியூட்ரோபில்களின் இருப்பு காயம் குணமடைவதற்குத் தீங்கு விளைவிக்கும் என்று கண்டறியப்பட்டுள்ளது35. நியூட்ரோபில்கள் நீக்கப்பட்ட எலிகளில் நடத்தப்பட்ட ஒரு ஆய்வில், நியூட்ரோபில்களின் இருப்பு மேல்தோல் மீளுருவாக்கத்தைத் தாமதப்படுத்தியது. அதிகப்படியான நியூட்ரோபில்களின் இருப்பு, சூப்பராக்சைடு மற்றும் ஹைட்ரஜன் பெராக்சைடு போன்ற புரோட்டியேஸ்கள் மற்றும் வினைத்திறன் கொண்ட ஆக்ஸிஜன் இனங்களின் உயர் மட்டங்களுக்கு வழிவகுக்கிறது, இவை நாள்பட்ட மற்றும் மெதுவாகக் குணமடையும் காயங்களுடன் தொடர்புடையவை37,38. அதேபோல், மேக்ரோபேஜ்களின் எண்ணிக்கையில் ஏற்படும் அதிகரிப்பு, கட்டுப்படுத்தப்படாவிட்டால், காயம் குணமடைவதைத் தாமதப்படுத்தும்39. மேக்ரோபேஜ்கள் அழற்சியைத் தூண்டும் நிலையிலிருந்து குணமடைவதைத் தூண்டும் நிலைக்கு மாற முடியாமல் போனால், இந்த அதிகரிப்பு குறிப்பாக முக்கியத்துவம் பெறுகிறது, இதன் விளைவாக காயங்கள் குணமடைதலின் அழற்சி கட்டத்திலிருந்து வெளியேறத் தவறுகின்றன40. அனைத்து வெள்ளிப் பூச்சுகளுடனும் 3 நாட்கள் சிகிச்சைக்குப் பிறகு, பயோஃபிலிம் தொற்றுள்ள காயங்களில் நியூட்ரோபில்கள் மற்றும் மேக்ரோபேஜ்களில் ஒரு குறைவைக் கண்டோம், ஆனால் ஆக்ஸிஜனேற்றப்பட்ட உப்புப் பூச்சுகளில் இந்தக் குறைவு மிகவும் அதிகமாக இருந்தது. இந்தக் குறைவானது, வெள்ளிக்கு எதிரான நோயெதிர்ப்புத் துலங்கல், குறைந்த உயிரிச்சுமைக்கான துலங்கல், அல்லது காயம் குணமடைதலின் பிந்தைய நிலையில் இருப்பதால் காயத்தில் உள்ள நோயெதிர்ப்பு செல்கள் குறைதல் ஆகியவற்றின் நேரடி விளைவாக இருக்கலாம். காயத்தில் உள்ள அழற்சி செல்களின் எண்ணிக்கையைக் குறைப்பது, காயம் குணமடைவதற்கு உகந்த சூழலைப் பராமரிக்கக்கூடும். Ag ஆக்சி உப்புகள் தொற்று-சாராத குணமடைதலை எவ்வாறு ஊக்குவிக்கின்றன என்பதன் செயல்பாட்டு முறை தெளிவாக இல்லை, ஆனால் Ag ஆக்சி உப்புகளுக்கு ஆக்ஸிஜனை உற்பத்தி செய்யும் மற்றும் அழற்சியின் ஊக்கியான ஹைட்ரஜன் பெராக்சைடின் தீங்கு விளைவிக்கும் அளவுகளை அழிக்கும் திறன் உள்ளது, இது இதற்கான விளக்கமாக இருக்கலாம் மற்றும் இதற்கு மேலதிக ஆய்வு தேவைப்படுகிறது¹⁷.
நாள்பட்ட, ஆறாத, தொற்றுள்ள புண்கள் மருத்துவர்களுக்கும் நோயாளிகளுக்கும் ஒரு பிரச்சனையாக இருக்கின்றன. பல கட்டுப்பொருட்கள் நுண்ணுயிர் எதிர்ப்புத் திறன் கொண்டவை எனக் கூறப்பட்டாலும், புண்ணின் நுண்ணிய சூழலைப் பாதிக்கும் மற்ற முக்கிய காரணிகள் மீது ஆய்வுகள் அரிதாகவே கவனம் செலுத்துகின்றன. இந்த ஆய்வு, வெவ்வேறு வெள்ளித் தொழில்நுட்பங்கள், தொற்றுநோயைப் பொருட்படுத்தாமல், வெவ்வேறு நுண்ணுயிர் எதிர்ப்புத் திறனையும், முக்கியமாக, புண்ணின் சூழல் மற்றும் குணமடைதல் மீது வெவ்வேறு விளைவுகளையும் கொண்டிருப்பதைக் காட்டுகிறது. இந்த ஆய்வக மற்றும் உயிருள்ள உயிரின ஆய்வுகள், புண் தொற்றுகளுக்குச் சிகிச்சையளிப்பதிலும் குணமடைதலை ஊக்குவிப்பதிலும் இந்தக் கட்டுப்பொருட்களின் செயல்திறனைக் காட்டினாலும், மருத்துவமனையில் இந்தக் கட்டுப்பொருட்களின் செயல்திறனை மதிப்பிடுவதற்கு சீரற்ற கட்டுப்பாட்டு சோதனைகள் தேவைப்படுகின்றன.
தற்போதைய ஆய்வின் போது பயன்படுத்தப்பட்ட மற்றும்/அல்லது பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட தரவுத்தொகுப்புகள், தகுந்த கோரிக்கையின் பேரில் தொடர்புடைய ஆசிரியரிடமிருந்து பெற்றுக்கொள்ளலாம்.